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    PCR實驗室污染事件處理!你可能缺少它?。?!

    發布時間:2021-03-10瀏覽:245次

    PCR實驗室污染事件處理!你可能缺少它?。?!

     
    如今,因為檢測量的加大,實驗室污染所導致的假陽性問題越來越嚴重,如幽靈般如影隨行。而現在的部分檢測實驗室為了提高檢測的靈敏度,通過高投入采購高品質的儀器和試劑來解決,這種投入產出立竿見影。檢測的特點也慢慢地體現了,檢測質量不能簡單用儀器和試劑的品牌價格來評估,人外加嚴格的試驗流程和管理制度才是檢測的核心。

     

    今天我想跟大家分享一個生在實驗室的核酸污染案例,從發現污染到處理的全過程。
     
     

    核酸污染不能避免

     
     

    核酸檢測實驗室的污染想全部避免是不可能的,我們能做的是隨時隨地保持警惕,盡早發現,及時處置,盡量減少損失。

     
    一天,一次PCR實驗中檢測員發現雖然陰性對照成立,但是4份陰性樣品都出現了擴增曲線。可以說實驗中肯定發生了污,但是污染是從何時開始的?污染源是什么?試驗被影響到的有多少?我們需要一一排查。
     
     
     
    仔細排查和清潔
     
     

     

    1.實驗活動全部停止,查看當天所有的試驗結果,發現受到污染的只有一個實驗。

     

    2.開封的劑耗材全部清理包括試劑準備區、核樣本制備區和擴增區;

     

    3.試管架、離心管架等可重復使用的物品浸泡到84消毒液中過夜,直到第二天用清水清洗晾曬后使用,注意一定要曬干;

     

    4.酒精核酸提取儀內部、移液器內外表面,再用核酸去除劑擦拭,同時啟用備用的移液器;

     

    5.用酒精對各區的生物安全柜、潔凈工作臺和實驗臺面拭后,再用核酸去除劑擦拭;

     

    6.用84消毒液對實驗室地面進行清潔;

     

    7.開窗,通風排氣。

     


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    適用于PCR實驗室儀器、耗材和空氣氣溶膠等的核酸清除,可有效降低環境中核酸污染對PCR實驗準確性的干擾。

     
     
    污染清除的實驗驗證
     
     
    1.開蓋裝有PBS的離心管放置在試劑準備的潔凈工作臺面、核酸提取儀內部、擴增區臺面、樣本制備區的生物安全柜內部,過夜;
    潔凈工作臺面
     

    生物安全柜內部

     

    核酸提取儀內部
     
    擴增區臺面
     
    2.在實驗臺面、生物安全柜臺面和潔凈工作臺面用采樣拭子蘸PBS反復擦拭后,放入PBS中進行洗脫。

    生物安全柜臺面取樣

     

    取樣后洗脫
     

    3.用采樣拭子蘸PBS后對移液器的內外表面進行取樣,取樣后放入PBS中進行洗脫。

    移液器內表面取樣

    4.將配液的移液器和加模板的移液器換上無濾芯槍頭,在PBS中反復吹吸10次,測試移液器內部是否存在污染。

     

     

    測試配液的移液器

     
     
    測試結果
     
     

     

    1.測試結果發現樣本制備區的生物安全柜內加模板的移液器內外表面擦拭拭子為核酸陽性,其他檢測都是陰性。

    實驗室污染測試結果
     
    2.對樣本制備區的生物安全柜內加模板的移液器進行清潔和擦拭后,第二天對該移液器內表面和外表面擦拭拭子進行檢測,仍有擴增分別為39.89和39.63。
    3.對樣本制備區的生物安全柜內加模板的移液器進行清潔和擦拭后,過二天后對該移液器內表面和外表面擦拭拭子進行檢測,檢測結果為陰性。
    移液器污染測試結果
     
     
     
    持續監測
     
     

    本次污染事件中從發現到清理測試后,完全恢復了實驗活動。雖然可以確定的是樣本制備區的生物安全柜內加模板的移液器發生了污染。但是由于可能造成污染的因素很多,移液器是否是污染因素我們很難確定。后續的幾天仍然在檢測中增加陰性對照,持續對環境等樣品進行監測,確保污染被徹底清除。

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